Surveillance en temps réel de l’expression génique dans des tranches de cerveau via l’imagerie tridimensionnelle

Résumé

Source : Shimojo, H., et al. Imagerie par bioluminescence en temps réel de la dynamique de signalisation Notch au cours de la neurogenèse murine. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, des cultures de coupes corticales d’embryons de souris transgéniques sont utilisées pour surveiller l’expression des gènes grâce à l’imagerie tridimensionnelle. La bioluminescence, la fluorescence et les images en fond clair sont utilisées pour visualiser l’expression des gènes en temps réel pendant la différenciation neuronale dans le tissu natif.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Visualisation de l’expression du rapporteur de la luciférase dans les cultures de tranches
   1. Démarrez le système d’imagerie en direct par luminescence avant de commencer la dissection. Pour les cultures en tranches corticales, utilisez les conditions suivantes : 40 % O₂, 5 % CO₂ et 37 °C.
   2. Mettez l’huile d’immersion sur l’objectif 40x. Placez la boîte d’échantillonnage sur la platine du microscope. Acquérez l’image de test fluorescente et réglez la position et le plan de mise au point sur la région d’intérêt sous l’éclairage de la lumière d’excitation.
   3. Exécutez l’acquisition en accéléré par acquisitions en 3 dimensions (luminescence, fluorescence et champ clair) pendant 24 h (Figure 1F-H). Pour l’acquisition d’images par luminescence, utilisez les paramètres suivants de l’appareil photo : faible taux de transfert (50 kHz), binning 2x2/4x4, temps d’exposition 10 min/5 min. Pour l’acquisition d’images en fluorescence et en fond clair, utilisez les paramètres suivants : taux de transfert intermédiaire (1 MHz), binning 1x1 et temps d’exposition de 100 ms.

Résultats

Figure 1 : Réalisation des tranches corticales du télencéphale embryonnaire et visualisation de la dynamique de la protéine Dll1 dans les cultures de tranches corticales. (A) Vérification de l’expression de l’EGFP à l’aide d’un micr...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Circulateur d’eau glacée (chiller)	Julabo	Modèle : F12-ED
Caméra CCD refroidie	Andor Technology	Modèle : iKon-M 934
Système	d’incubateur TOKAI HIT	Modèle : INU-ONICS
Microscope inversé	Olympus	Modèle : IX81
Microscope inversé	Olympus	Modèle : IX83
Dispositif d’éclairage LED	CoolLED	Modèle : pE1
MetaMorph	MOLECULAR DEVICES	Modèle : 40000
Régulateur de gaz de mélange	Tokken	Modèle : TK-MIGM OLO2
Objectif Objectif	Olympus	Modèle : UPLFLN 40X O